RESUMO
Objetivo: El tejido óseo tiene la capacidad de adaptarse a los estímulos del entorno alterando su morfología y metabolismo. Las diferentes células óseas se comunican entre sí a través de uniones comunicantes (UCs). La conexina 43 (Cx43) es la proteína más abundante de las UCs; tiene funciones clave en la transducción de señales y en la respuesta a estímulos hormonales y mecánicos. Otro elemento mecanosensor de los osteocitos es el cilio primario, formado por microtúbulos y que se desarrolla en la fase G0 del ciclo celular. Los objetivos de este estudio fueron determinar la implicación de la Cx43 y del cilio primario en la actividad de los osteocitos, analizar la posible interacción entre estos dos mecanosensores, y evaluar el papel que desempeñan en la detección y respuesta de los osteocitos ante el estímulo mecánico y la estimulación del receptor de la parathormona tipo 1 (PTH1R) por su ligando, la proteína relacionada con la parathormona (PTHrP) (1-36). Material y métodos: Se comparó la línea celular de osteocitos MLO-Y4 control (Cx43+/+) con MLO-Y4 deficientes en Cx43 (Cx43-/-). El análisis de expresión de la proteína del transporte intraflagelar 88 (IFT88), de la Cx43 y de la fosforilación de la quinasa reguladora de la señal extracelular (P-ERK) se determinó mediante Western blot. Para caracterizar la posible colocalización entre el cilio primario y Cx43 se realizó una inmunofluorescencia. Para simular el estímulo mecánico in vitro, las células se sometieron a un estrés mecánico de 10 dinas/cm2 por flujo de fluido durante 10 minutos. Resultados: Los resultados obtenidos muestran que el número de células con cilio primario no varía por la expresión de Cx43 (p=0,089); y que en las células con presencia en Cx43, el estímulo mecánico por flujo de fluido y la PTHrP aumentan la fosforilación de quinasas reguladas por señal extracelular (ERK) respecto a las células no estimuladas (p=0,049 y p=0,011, respectivamente). (AU)
Objetivo: Bone tissue can adapt to environmental stimuli by altering its morphology and metabolism. Different bone cells communicate with each other through communicating junctions (CJs). Connexin 43 (Cx43) is the most abundant CJ protein with key functions in signal transduction and in response to hormonal and mechanical stimuli. Another mechanosensor element of osteocytes is the primary cilium, formed by microtubules and which develops in the cell cycles G0 phase. Our study aims to determine Cx43 and primary cilium involvement in osteocytic activity, to analyze the possible interaction between these two mechanosensors and to assess the role they play in the detection and response of osteocytes to mechanical stimuli and stimulation of the parathormone type 1 receptor (PTH1R) by its ligand, the parathormone-related protein (PTHrP) (1-36). Material and methods: The control MLO-Y4 (Cx43 +/+) osteocyte cell line was compared to Cx43-deficient MLO-Y4 (Cx43 -/-). The expression analysis of intraflagellar transport protein 88 (IFT88), Cx43 and phosphorylation of the extracellular signal regulatory kinase (P-ERK) was determined by Western blot. To characterize the possible colocalization between the primary cilium and Cx43, an immunofluorescence was carried out. To simulate mechanical stimulation in vitro, cells were subjected to mechanical stress of 10 dynes/cm2 by fluid flow for 10 minutes. Results: The results obtained show that the number of cells with primary cilium does not vary due to the expression of Cx43 (p = 0.089). In cells with Cx43 presence, mechanical stimulation by fluid flow and PTHrP increase the phosphorylation of extracellular signal-regulated kinases (ERK) compared to unstimulated cells (p = 0.049 and p = 0.011, respectively). (AU)
